Работа с иммерсионным объективом.: 1. Поставить объектив с увеличением х90 или х100. 2. На мазок нанести

3 Правила работы с иммерсионным объективом

Работа с иммерсионным объективом.: 1. Поставить объектив с увеличением х90 или х100. 2. На мазок нанести

При работе смасляным иммерсионным объективомследует соблюдать определенные правила.Дляпроведения исследования при помощиобъектива 100х все образцы следует закрывать покровнымистеклами. Насухой фиксированный окрашенный препаратнаносят каплю иммерсионного масла.

Устанавливают объектив 100х и, глядясбоку, осторожно поднимают предметныйстолик микроскопа до погружения линзыобъектива в масло. Следят за тем, чтобыфронтальная линза объектива не коснуласьпокровного стекла. Затем, наблюдая вокуляр, макровинтом медленно опускаютпредметный столик и фокусируют объектив.

Тонкую фокусировку осуществляют спомощью микрометрического винта.

По окончаниимикроскопирования опускают предметныйстолик, снимают препарат и осторожнопротирают фронтальную линзу сначаласухой хлопчатобумажной салфеткой илифильтровальной бумагой, а затем салфеткой,слегка смоченной очищенным бензином.

Нельзя оставлять масло на поверхностилинзы, так как на нем фокусируется пыль,что может со временем привести кповреждению оптики объектива. Эффективенспособ удаления масла как жидкого, таки застывшего, свежеотломленнымпенопластом. В отдельных случаях помогаетпротирка тканью, смоченной дистиллированнойводой.

Края линз с выступающей оправойочищают с помощью палочки, обернутойтканью.

4 Приемы микроскопирования живых микроорганизмов

Нативные(прижизненные) препаратыготовят для исследования живыхнеокрашенных бактерий.

Наиболеераспространенными являются методы«висячей капли», «раздавленной капли»,«отпечаток», «агаровая пленка», микрокамеры с плотными средами.

Препаратыживых клеток обычно рассматривают с«сухими» системами микроскопа. Дляприжизненного изучения бактерий частоиспользуют фазово-контрастную итемнопольную микроскопию.

Морфологическоеразнообразие бактерий можно изучитьпри приготовлении негативного тушевогопрепарата, когда окрашивают суспензиютушью. В поле зрения микроскопа на общемтемном фоне туши отчетливо виднынеокрашенные клетки микроорганизмовразличной формы, разных размеров,расположенные в разнообразных сочетаниях.

Препараты,работа с которыми закончена, прежде чемвымыть, выдерживают в дезинфицирующемрастворе.

Препарат«раздавленная капля».На предметное стекло наносят каплюстерильной водопроводной воды, помещаютв нее небольшое количество клетокизучаемых микроорганизмов, размешиваюти накрывают покровным стеклом. Для этогопокровное стекло ставят на ребро у краякапли и постепенно опускают на нее.

Микроорганизмы, выращенные на плотнойили в жидкой питательной среде, переносятв каплю воды бактериологической петлей;выращенные в жидкой среде – переносятстерильной пипеткой. В последнем случаекаплю воды на предметное стекло можноне наносить. Капля исследуемого материаладолжна быть настолько мала, чтобы из-подпокровного стекла не выступал избытокжидкости.

Если он образовался, егонеобходимо удалить фильтровальнойбумагой. Препарат можно микроскопироватьс использованием иммерсионной системы.

Препарат «висячаякапля». Каплюсуспензии микроорганизмов петлей илиобычным пером наносят на покровноестекло, которое поворачивают каплейвниз и помещают на специальное предметноестекло с углублением (лункой) в центре.

Капля должна свободно висеть, не касаяськраев и дна лунки. Края лунки предварительносмазывают вазелином. Капля оказываетсягерметизированной во влажной камере,что делает возможным многодневноенаблюдение за объектом.

При работе сбактериями этот метод используетсяредко.

Препарат«отпечаток». Изагаризованой среды, на которой растутмикроорганизмы, вырезают скальпелемнебольшой кубик и переносят на предметноестекло так, чтобы поверхность смикроорганизмами была обращена вверх.

Затем к газону или к колонии прикладываютчистое покровное стекло, слегканадавливают на него петлей или пинцетоми тотчас же снимают, стараясь не сдвинутьв сторону. Полученный препарат помещаютотпечатком вниз в каплю воды илиметиленового синего (1 : 40) на предметноестекло.

Отпечаток можно получить и напредметном стекле, если касатьсяповерхности колонии или газона предметнымстеклом. Препарат «отпечаток» используютв основном при исследовании спороношениястрептомицетов.

Препарат«микрокультура» (или«агаровая пленка»).На тонкое, простерилизованное и нагретоепредметное стекло наносят стерильнойнагретой пипеткой 0,2–0,3мл горячей агаризованной питательнойсреды и распределяют ее по всей поверхностистекла. После застывания среды удаляютпетлей лишний агар, оставляя два тонкихучастка пленки величиной с покровноестекло каждый.

В центр квадратовбактериальной петлей или пипеткойнаносят каплю жидкой культуры илисуспензии клеток микроорганизма. Стеклопомещают во влажную камеру (чашка Петрисо слоем мокрой фильтровальной бумаги),которую ставят в термостат.

Передмикроскопированием на пленку с выросшеймикрокультурой наносят каплю красителяили каплю воды в случае подсыханияпленки, и затем осторожно накрываютпокровным стеклом.

Выращиваниемикроорганизмов непосредственно напредметном стекле позволяет вестимикроскопическое наблюдение за процессамиих роста и развития, изучать циклразвития, способ размножения(деление-почкование), влияние на этипроцессы каких-либо агентов. На препаратахне нарушается естественное расположениеклеток в растущей микроколонии.Выращивание микроколонии можно проводитьв аэробных или анаэробных (под покровнымстеклом, загерметизированном лаком)условиях.

Агаровую пленкуможно нанести на покровное стекло иприготовить препарат «висячая капля».На таком препарате можно наблюдатьдвижение бактерий по типу скольжения.Движениебактерий засчет жгутиков можно наблюдать во влажныхпрепаратах, применяя в большинствеслучаев светлопольный микроскоп.Наиболее эффективно наблюдение заподвижностью в темнопольном микроскопе.

Вопросы длясамоконтроля

1 Перечислитеосновные задачи микроскопии.

2 Охарактеризуйтеследующие виды микроскопии: светлопольная,фазово-контрастная, темнопольная,люминесцентная, электронная, сканирующая,компъютерная интерференционная.

3 Каково устройствосветлопольного микроскопа?

4 В чем сущностьиммерсионного метода микроскопирования?

5 Охарактеризуйтеспособы приготовления препаратов живыхклеток микроорганизмов.

Практическоезанятие 3

Цель: ознакомлениес особенностями разных видов микроскопии,изучениеустройствасветлопольного микроскопа; овладениеметодом иммерсионного микроскопирования;ознакомление с приемами микроскопированияживых клеток микроорганизмов.

Материалы иоборудование:микроскопы биологические, предметныеи покровные стекла, спиртовки, спички,бактериальные петли, иммерсионноемасло, стерильные медицинские пипетки,пинцеты, палочки ватные гигиенические, фильтровальная бумага, пенициллиновыебутылочки со стерильной водопроводнойводой, ванночки, мостики, немытые фруктыили овощи, суспензия гороха (либо настоимяса, рыбы, овощей и др.).

Ход работы

1 Ознакомиться сосновными задачами микроскопии.

2 Используя материал,представленный в п. 2 данного руководства,ознакомиться с различными видамимикроскопии. Выяснить их особенностипо схеме таблицы 3.1, записать в рабочуютетрадь.

Таблица 3.1 –Особенности различных видов микроскопии

ВидымикроскопииИсточник света, принципполученияизображенияМаксимальная(ое)Областьприменения
разрешающая способ-ностьувели-чение микро-скопа
1 Светлопольная
2 Темнопольная
3 Фазово-контрастная
4Люминесцентная
5 Электронная
6 Сканирующая световая
7 Сканирующаяэлектронная
8 Компъютернаяинтерференционная
9 Лазерная конфокальная

3 Изучить устройствосветлопольного микроскопа, используяописание в п. 3 методического руководстваи рассматривая микроскоп.

4 Ознакомиться ссущностью иммерсионного методамикроскопирования, его преимуществомпри работе с микроорганизмами, правиламипользования иммерсионным объективом.

5 Охарактеризоватьсветлопольный микроскоп по схеме таблицы3.2. Записать в рабочую тетрадь.

Таблица 3.2 –Устройство микроскопа биологического

Параметры, свойстваХарактеристика микроскопа
Микроскоп биологический состоит из следующих двух частей:
Увеличение окуляров
Увеличение объективов
Увеличение микроскопа: а) минимальное; б) максимальное
Оформление оправы иммерсионного масляного объектива
Увеличение иммерсионного объектива
Сущность иммерсионного метода микроскопирования
Правила ухода за иммерсионным объективом

6 Ознакомиться сразличными приемами микроскопированияживых микроорганизмов.

7 Приготовитьпрепараты по методу «раздавленнаякапля» из различных объектов: смывафруктов, стола, рук, различных настоев,пользуясь описанием методики, изложеннойв п. 5 данного руководства.

8 Препаратымикроскопировать с объективами 10х и100х. Определить форму и сочетание клеток,подвижность. Выполнить зарисовки.

9 Все наблюденияи рисунки отметить в таблице 3.3. Подрисунком указать увеличение микроскопа.

10 Указать в выводахстепень наблюдаемого разнообразияпрокариот; преимущества и недостаткииспользования в работе прижизненныхпрепаратов.

Таблица 3.3 –Некоторые особенности морфологии клеток

микроорганизмов

ПараметрыХарактеристика
Состав среды, объектисследования
Возраст культуры
Форма клеток
Сочетание клеток
Подвижность
Рисунок клеток
Выводы:

Источник: https://studfile.net/preview/5244850/page:10/

Микроскоп с иммерсионным объективом – Статьи на сайте Четыре глаза

Работа с иммерсионным объективом.: 1. Поставить объектив с увеличением х90 или х100. 2. На мазок нанести

»Статьи и полезные материалы »Микроскопы »Статьи о микроскопах, микропрепаратах и исследованиях микромира »Иммерсионная система микроскопа

Многие начинающие любители микробиологии при упоминании иммерсионной системы представляют себе нечто сложное, дорогостоящее и совершенно им не нужное. Мол, это какая-то узкоспециализированная вещь, которая пригодится лишь профессионалам, а в домашнем хобби она совсем не нужна. Это не совсем верно.

Возможно, она не всегда и всем пригодится, но точно проста в использовании и доступна многим. Иммерсионная система микроскопа – это всего лишь иммерсионный объектив. Как только вы установите его на свой микроскоп, он тут же превратится в иммерсионную систему.

Иммерсионный объектив подойдет практически к любому световому микроскопу, а купить его можно в большинстве специализированных магазинов. Однако зачем  он все-таки нужен?

Микроскоп с иммерсионным объективом используется для наблюдений иммерсионным методом.

Согласно ему между объективом и образцом вводится жидкость, благодаря которой увеличивается разрешение и яркость изображения, уменьшается хроматизм картинки, а паразитные отражения практически исчезают.

Иммерсионная жидкость также позволяет превысить высший предел увеличения микроскопа. Иммерсионное увеличение микроскопа может в 1,5–2 раза превышать максимальное полезное увеличение микроскопа с «сухим» объективом.

Различают объективы для масляной и для водной иммерсии. Для первых в качестве иммерсионной жидкости используется специальное синтетическое масло, для вторых – дистиллированная вода. Можно использовать и другие жидкости, например глицерин или органическое масло, но разрешение картинки будет низким.

Иммерсионное увеличение микроскопа

Если на вашем микроскопе установлен обычный «сухой» объектив, не предназначенный для иммерсионного метода исследований, вряд ли его кратность превышает 40х.

А верхний предел увеличения микроскопа, вероятно, находится около отметки в 1000 крат.

Заменив «сухой» объектив на иммерсионный, вы сможете изучать структуры образцов на кратности в 2000х без падения качества картинки. Но почему это невозможно без иммерсии?

Согласно физическим законам полезное увеличение микроскопа, при котором детали образцов хорошо различимы, не может превышать значение числовой апертуры объектива более чем в 1000 раз. Числовая апертура «сухого» объектива обычно составляет 0,95–1. Даже если он будет 100-кратным, а окуляры 20-кратными, на максимальном увеличении вы увидите лишь размазанную картинку.

Изображению не будет хватать четкости и яркости. Иммерсионный метод исследований позволяет раздвинуть эти пределы. Объектив погружают в иммерсионную жидкость, благодаря которой апертура объектива увеличивается, а значит, и улучшается разрешение картинки.

На больших увеличениях иммерсионный микроскоп демонстрирует большую детализацию и контрастность изображения в сравнении с обычными световыми моделями.

4glaza.ru
Август 2017

Использование материала полностью для общедоступной публикации на носителях информации и любых форматов запрещено. Разрешено упоминание статьи с активной ссылкой на сайт www.4glaza.ru.

Производитель оставляет за собой право вносить любые изменения в стоимость, модельный ряд и технические характеристики или прекращать производство изделия без предварительного уведомления.

Другие обзоры и статьи о микроскопах, микропрепаратах и микромире:

  • ! Микроскоп Levenhuk 870T: видеообзор (канал MAD SCIENCE, .com)
  • ! Микроскоп Levenhuk 870T: видео соленой воды (канал MAD SCIENCE, .com)
  • Медицинские микроскопы Levenhuk MED: обзорная статья на сайте levenhuk.ru
  • ! Портативный микроскоп Bresser National Geographic 20–40x и другие детские приборы линейки: видеообзор (канал «Татьяна Михеева», .com)
  • Книги знаний издательства Levenhuk Press: подробный обзор на сайте levenhuk.ru
  • ! Книга знаний в 2 томах. «Космос. Микромир»: видеопрезентация (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! бактерий под микроскопом Levenhuk Rainbow 2L PLUS (канал «Микромир под микроскопом», .ru)
  • Обзор микроскопа Levenhuk Rainbow 50L PLUS на сайте levenhuk.ru
  • ! Подробный обзор серии детских микроскопов Levenhuk LabZZ M101 (канал Kent Channel TV, .ru)
  • Обзор набора оптической техники Levenhuk LabZZ MTВ3 (микроскоп, телескоп и бинокль) на сайте levenhuk.ru
  • ! Микроскоп Levenhuk DTX 90: распаковка и видеообзор цифрового микроскопа (канал Kent Channel TV, .ru)
  • ! презентация увлекательной и красочной книги для детей «Невидимый мир» (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Большой обзор биологического микроскопа Levenhuk 3S NG (канал Kent Channel TV, .ru)
  • Микроскопы Levenhuk Rainbow 2L PLUS
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow и LabZZ (канал LevenhukOnline, .ru)
  • Микроскоп Levenhuk Rainbow 2L PLUS Lime\Лайм. Изучаем микромир
  • Выбираем лучший детский микроскоп
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow 2L: видеообзор серии микроскопов (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow 2L PLUS: видеообзор серии микроскопов (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow 50L: видеообзор серии микроскопов (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскопы Levenhuk Rainbow 50L PLUS: видеообзор серии микроскопов (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскоп Levenhuk Rainbow D2L: видеообзор цифрового микроскопа (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Микроскоп Levenhuk Rainbow D50L PLUS: видеообзор цифрового микроскопа (канал LevenhukOnline, .ru)
  • Обзор биологического микроскопа Levenhuk Rainbow 50L
  • ! обзор школьных микроскопов Levenhuk Rainbow 2L и 2L PLUS: лучший подарок ребенку (канал KentChannelTV, .ru)
  • ! Как выбрать микроскоп: видеообзор для любителей микромира (канал LevenhukOnline, .ru)
  • Галерея фотографий! Наборы готовых микропрепаратов Levenhuk
  • Микроскопия: метод темного поля
  • ! «Один день инфузории-туфельки»: видео снято при помощи микроскопа Levenhuk 2L NG и цифровой камеры Levenhuk (канал LevenhukOnline, .ru)
  • ! Обзор микроскопа Levenhuk Rainbow 2L NG Azure на телеканале «Карусель» (канал LevenhukOnline, .ru)
  • Обзор микроскопа Levenhuk Фиксики Файер
  • Совместимость микроскопов Levenhuk с цифровыми камерами Levenhuk
  • Как работает микроскоп
  • Как настроить микроскоп
  • Как ухаживать за микроскопом
  • Типы микроскопов
  • Техника приготовления микропрепаратов
  • Галерея фотографий! Что можно увидеть в микроскопы Levenhuk Rainbow 50L, 50L PLUS, D50L PLUS
  • Сетка или шкала. Микроскоп и возможность проведения точных измерений
  • Обычные предметы под объективом микроскопа
  • Насекомые под микроскопом: фото с названиями
  • Инфузории под микроскопом
  • Изобретение микроскопа
  • Как выбрать микроскоп
  • Как выглядят лейкоциты под микроскопом
  • Что такое лазерный сканирующий микроскоп?
  • Микроскоп люминесцентный: цена высока, но оправданна
  • Микроскоп для пайки микросхем
  • Иммерсионная система микроскопа
  • Измерительный микроскоп
  • Микроскопы от самых больших профессиональных моделей до простых детских
  • Микроскоп профессиональный цифровой
  • Силовой микроскоп: для серьезных исследований и развлечений
  • Лечение зубов под микроскопом
  • Кровь человека под микроскопом
  • Галогенные лампы для микроскопов
  • Французские опыты – микроскопы и развивающие наборы от Bondibon
  • Наборы препаратов для микроскопа
  • Юстировка микроскопа
  • Микроскоп для ремонта электроники
  • Операционный микроскоп: цена, возможности, сферы применения
  • «Шкаловой микроскоп» – какой оптический прибор так называют?
  • Бородавка под микроскопом
  • Вирусы под микроскопом
  • Принцип работы темнопольного микроскопа
  • Покровные стекла для микроскопа – купить или нет?
  • Увеличение оптического микроскопа
  • Оптическая схема микроскопа
  • Схема просвечивающего электронного микроскопа
  • Устройство оптического микроскопа у теодолита
  • Грибок под микроскопом: фото и особенности исследования
  • Зачем нужна цифровая камера для микроскопа?
  • Предметный столик микроскопа – что это и зачем он нужен?
  • Микроскопы проходящего света
  • Органоиды, обнаруженные с помощью электронного микроскопа
  • Паук под микроскопом: фото и особенности изучения
  • Из чего состоит микроскоп?
  • Как выглядят волосы под микроскопом?
  • Глаз под микроскопом: фото насекомых
  • Микроскоп из веб-камеры своими руками
  • Микроскопы светлого поля
  • Механическая система микроскопа
  • Объектив и окуляр микроскопа
  • USB-микроскоп для компьютера
  • Универсальный микроскоп – существует ли такой?
  • Песок под микроскопом
  • Муравей через микроскоп: изучаем и фотографируем
  • Растительная клетка под световым микроскопом
  • Цифровой промышленный микроскоп
  • ДНК человека под микроскопом
  • Как сделать микроскоп в домашних условиях
  • Первые микроскопы
  • Микроскоп стерео: купить или нет?
  • Как выглядит раковая клетка под микроскопом?
  • Металлографический микроскоп: купить или не стоит?
  • Флуоресцентный микроскоп: цена и особенности
  • Что такое «ионный микроскоп»?
  • Грязь под микроскопом
  • Как выглядит клещ под микроскопом
  • Как выглядит червяк под микроскопом
  • Как выглядят дрожжи под микроскопом
  • Что можно увидеть в микроскоп?
  • Зачем нужны исследовательские микроскопы?
  • Бактерии под микроскопом: фото и особенности наблюдения
  • На что влияет апертура объектива микроскопа?
  • Аскариды под микроскопом: фото и особенности изучения
  • Как использовать микропрепараты для микроскопа
  • Изучаем ГОСТ: микроскопы, соответствующие стандартам
  • Микроскоп инструментальный – купить или нет?
  • Где купить отсчетный микроскоп и зачем он нужен?
  • Атом под электронным микроскопом
  • Как кусает комар под микроскопом
  • Как выглядит муха под микроскопом
  • Амеба: фото под микроскопом
  • Подкованная блоха под микроскопом
  • Вша под микроскопом
  • Плесень хлеба под микроскопом
  • Зубы под микроскопом: фото и особенности наблюдения
  • Снежинка под микроскопом
  • Бабочка под микроскопом: фото и особенности наблюдений
  • Самый мощный микроскоп – как выбрать правильно?
  • Рот пиявки под микроскопом
  • Мошка под микроскопом: челюсти и строение тела
  • Микробы на руках под микроскопом – как увидеть?
  • Вода под микроскопом
  • Как выглядит глист под микроскопом
  • Клетка под световым микроскопом
  • Клетка лука под микроскопом
  • Мозги под микроскопом
  • Кожа человека под микроскопом
  • Кристаллы под микроскопом
  • Основное преимущество световой микроскопии перед электронной
  • Конфокальная флуоресцентная микроскопия
  • Зондовый микроскоп
  • Принцип работы сканирующего зондового микроскопа
  • Почему трудно изготовить рентгеновский микроскоп?
  • Макровинт и микровинт микроскопа – что это такое?
  • Что такое тубус в микроскопе?
  • плоскость поляризатора
  • На что влияет угол между главными плоскостями поляризатора и анализатора?
  • Назначение поляризатора и анализатора
  • Метод изучения – микроскопия на практике
  • Микроскопия осадка мочи: расшифровка
  • Анализ «Микроскопия мазка»
  • Сканирующая электронная микроскопия
  • Методы световой микроскопии
  • Оптическая микроскопия (световая)
  • Световая, люминесцентная, электронная микроскопия – разные методы исследований
  • Темнопольная микроскопия
  • Фазово-контрастная микроскопия
  • Поляризаторы естественного света
  • Шотландский физик, придумавший поляризатор
  • Механизм фокусировки в микроскопе
  • Что такое полевая диафрагма?

Источник: https://www.4glaza.ru/articles/immersionnaya-sistema-mikroskopa/

Оптика микроскопа (оптическая часть)

Работа с иммерсионным объективом.: 1. Поставить объектив с увеличением х90 или х100. 2. На мазок нанести

     Оптические узлы и принадлежности обеспечивают основную функцию микроскопа — создание увеличенного изображения объекта с достаточной степенью достоверности по форме, соотношению размеров составляющих элементов и цвету. Кроме этого, оптика должна обеспечивать такое качество изображения, которое отвечает целям исследования и требованиям методик проводимого анализа. 

     Основными оптическими элементами микроскопа являются оптические элементы, образующие осветительную (в том числе, конденсор), наблюдательную (окуляры) и воспроизводящую (в том числе объективы) системы микроскопа.

Объективы микроскопа

     Объективы микроскопа представляют собой оптические системы, предназначенные для построения микроскопического изображения в плоскости изображения с соответствующим увеличением, разрешением элементов, точностью воспроизведения по форме и цвету объекта исследования.

Они имеют сложную оптико-механическую конструкцию, которая включает несколько одиночных линз и компонентов, склеенных из 2-х или 3-х линз.

Количество линз обусловлено кругом решаемых объективом задач. Чем выше качество изображения, даваемое объективом, тем сложнее его оптическая схема.

Общее число линз в сложном объективе может доходить до 14 (например, это может относиться к планапохроматическому объективу с увеличением 100х и числовой апертурой 1,40).

     Объектив состоит из фронтальной и последующей частей. Фронтальная линза (или система линз) обращена к препарату и является основной при построении изображения соответствующего качества, определяет рабочее расстояние и числовую апертуру объектива.

Последующая часть в сочетании с фронтальной обеспечивает требуемое увеличение, фокусное расстояние и качество изображения, а также определяет высоту объектива и длину тубуса микроскопа.

 

Числовая апертура и увеличение объективов

Чем больше NA (апертура) объектива, тем более мелкие детали он может  разрешать. Если посмотреть на паспортные данные объективов, то можно видеть, что увеличение и апертура не связаны строго между собой. Так, например, существуют объективы 40/0,65; 40/1,3 и 100/1,3.

Первые два дают изображения, сходные по размерам, однако второй позволяет различить более мелкие детали. Два последних объектива, масляно-иммерсионные, имеют одинаковое разрешение, но объектив 40 позволяет наблюдать большую площадь препарата (при меньшем увеличении) по сравнению с объективом 100.

Объективы следует выбирать, исходя, главным образом, из их апертуры, а следовательно, из разрешающей способности, а не из увеличения. В настоящее время многие микроскопы снабжены системами переменного увеличения, которые позволяют изменять конечное увеличение приблизительно вдвое. Кроме того, при печати можно давать дополнительное фотоувеличение.

Из трех упомянутых выше объективов при прочих равных характеристиках рекомендуется  для получения качественных фотомикрографий объектив 40/1,3.

Исправление аберраций

Объективы для микроскопов подразделяются на несколько типов в зависимости от степени исправления хроматической и сферической аберраций. Эти типы можно в свою очередь подразделить в соответствии с тем, насколько объективы свободны от кривизны поля зрения, каковы их увеличение и числовая апертура, являются ли они сухими или иммерсионными.

Простейшие объективы — это ахроматы, которые сводят синие и красные лучи в один фокус, несколько отличающийся от фокуса для зеленого света. Даваемое ими изображение может иметь слабо заметные цветные кольца, окрашенные в зависимости от фокусировки в зеленый или пурпурный цвет.

Ахроматы исправлены в отношении сферической аберрации только для зеленых лучей. Они сравнительно дешевы и пригодны для визуальных наблюдений. Для фотомикрографии их следует использовать по возможности вместе с монохроматическим зеленым светофильтром  или интерференционным

зеленым фильтром.

Тогда они дают сравнительно хорошие результаты.

Флюоритовые объективы (названные так потому, что в них стоят линзы из минерала флюорита), или полуапохроматы, лучше исправлены в отношении хроматической аберрации, чем ахроматы.

Благодаря этому они выпускаются с относительно большей (при данном увеличении) апертурой и дают более качественное и контрастное изображение. Простота конструкции и большая светосила делают флюоритовые объективы удобными для флуоресцентной микроскопии.

Они также могут быть с успехом использованы для фотомикрографии.  

Апохроматы представляют собой наиболее скорректированные объективы, у которых практически

полностью исправлена хроматическая аберрация, а сферическая аберрация исправлена не для одного, а для двух цветов. Эти объективы дают высококачественное изображение и более всего подходят для качественной фотомикрографии, особенно в цвете. Такие объективы сложны в изготовлении, поэтому в микроскопах многих фирм добиваются коррекции вторичной хроматической аберрации с помощью специальных «компенсационных» окуляров. По этой причине полностью исправленная система состоит из объектива и соответствующего окуляра. Для объективов, изготовленных различными фирмами, а иногда и для разных объективов, выпускаемых одной фирмой, нужны различные окуляры. В некоторых случаях полная коррекция аберраций проведена в самом объективе. Обычно практикуемая в лабораториях беспорядочная замена оптических элементов, очевидно, не может дать хороших результатов. Если нет уверенности в целесообразности той или иной замены, то следует обратиться к инструкциям изготовителя.

Сухие объективы и толщина покровного стекла

Если использовать объектив не так, как рекомендуется, то качество изображения ухудшится из-за неполной коррекции сферической аберрации. Для большинства сухих объективов (то есть рассчитанных на воздушную прослойку между препаратом и фронтальной линзой) требуется покровное стекло толщиной 0,17 мм, и последнее число выгравировано на их оправе.

Некоторые объективы, маркированные Эпи (Epi), 0, или просто «—», рассчитаны на работу с непокрытым препаратом, другие, наоборот, могут быть использованы при работе с культуральными флаконами и рассчитаны на толщину их стенок до 2 мм.

Небольшие отклонения в толщине покровного стекла, как правило, несущественны для объективов с апертурой менее 0,65, но имеют значение для сухих объективов с большой апертурой (0,75—0,95). Эти объективы часто имеют коррекционную оправу, которая позволяет добиваться максимальной коррекции сферической аберрации за счет изменения расстояния между линзами объектива.

Даже при использовании покровного стекла нужной толщины может потребоваться коррекция на дополнительную толщину, создаваемую заливочной средой.

Иммерсионные объективы
     Иммерсия (от лат. immersio — погружение) — жидкость, заполняющая пространство между объектом наблюдения и специальным иммерсионным объективом (конденсором и предметным стеклом). Иммерсионные объективы необходимо использовать в тех случаях, когда нужна апертура 1,0 и более.

Иммерсионная жидкость, расположенная между объектом и фронтальным компонентом объектива, увеличивает угол, под которым рассматривается объект (апертурный угол). Большинство иммерсионных объективов рассчитаны на работу со специально изготовленным маслом.

Кроме того, имеются объективы для работы с водной и с глицериновой иммерсией, а также объективы, настраиваемые для работы с любой иммерсионной средой. Поскольку оптические свойства заливочной среды, покровного стекла и иммерсионного масла близки, то большая или меньшая толщина одного слоя по сравнению с другим не приводит к искажениям.

Поэтому при фотомикрографии значительно лучше использовать иммерсионный объектив 40/1,0. а не сухой 40/0,95. Другими словами, особенности использования иммерсионных объективов таковы: 1. повышение видимости за счет увеличения разности показателя преломления среды и объекта; 2. увеличение глубины просматриваемого слоя, который зависит от показателя преломления среды.

Кроме того, иммерсионная жидкость может уменьшать количество рассеянного света за счет исчезновения бликов от объекта. При этом устраняются неизбежные потери света при его попадании в объектив.

Поскольку иммерсионные масла несколько различаются, то при их применении следует руководствоваться рекомендациями фирмы-изготовителя оптики.

Особенно важно избегать смешения различных масел. Если на объективе остались следы масла, то при использовании другого масла качество изображения может ухудшиться, поэтому объективы  необходимо чистить.

Глубина резкости

Многие объективы дают изображение, в котором центральная часть и периферия не могут быть сфокусированы одновременно.

Чтобы решить данную проблему, фирмы-изготовители выпускают специальные объективы с минимальной
кривизной поля зрения, которые отмечены приставкой «План» (Plan), например Планахромат и Планапохромат, где исправлена кривизна изображения по полю, что обеспечивает резкое изображение объекта по всему полю наблюдения.

     По параметрическим признакам объективы делятся следующим образом:

• объективы с конечной длиной тубуса (например, 160 мм) и объективы, скорректированные на длину тубуса «бесконечность» (например, с дополнительной тубусной системой, имеющей фокусное расстояние 160 мм); • объективы малых (до 10х); средних (до 50х) и больших (более 50х) увеличений, а также объективы со сверхбольшим увеличением (свыше 100 х); • объективы малых (до 0,25), средних (до 0,65) и больших (более 0,65) числовых апертур, а также объективы с увеличенными (по сравнению с обычными) числовыми апертурами (например, объективы апохроматической коррекции, а также специальные объективы для люминесцентных микроскопов); • объективы с увеличенными (по сравнению с обычными) рабочими расстояниями, а также с большими и сверхбольшими рабочими расстояниями (объективы для работы в инвертированных микроскопах). Рабочее расстояние — это свободное расстояние между объектом (плоскостью покровного стекла) и нижним краем оправы (линзы, если она выступает) фронтального компонента объектива; • объективы, обеспечивающие наблюдение в пределах нормального линейного поля (до 18 мм); широкопольные объективы (до 22,5 мм); сверхширокопольные объективы (более 22,5 мм);

• объективы стандартные (45 мм, 33 мм) и нестандартные по высоте. Высота — расстояние от опорной плоскости объектива (плоскости соприкосновения ввинченного объектива с револьверным устройством) до плоскости предмета при сфокусированном микроскопе, является постоянной величиной и обеспечивает парфокальность комплекта аналогичных по высоте объективов разного увеличения, установленных в револьверном устройстве. Иными словами, если с помощью объектива одного увеличения получить резкое изображение объекта, то при переходе к последующим увеличениям изображение объекта остается резким в пределах глубины резкости объектива.

     По конструктивно-технологическим признакам существует следующее разделение:

• объективы, имеющие пружинящую оправу (начиная с числовой апертуры 0,50), и без нее; • объективы, имеющие ирисовую диафрагму внутри для изменения числовой апертуры (например, в объективах с увеличенной числовой апертурой, в объективах проходящего света для реализации метода темного поля, в поляризационных объективах отраженного света);

• объективы с корректирующей (управляющей) оправой, которая обеспечивает движение оптических элементов внутри объектива (например, для корректировки качества изображения объектива при работе с различной толщиной покровного стекла или с различными иммерсионными жидкостями; а также для изменения увеличения при плавной — панкратической — смене увеличения) и без нее.

     По обеспечению методов исследования и контрастирования объективы можно разделить следующим образом:

• объективы, работающие с покровным и без покровного стекла; • объективы проходящего и отраженного света (безрефлексные); люминесцентные объективы (с минимумом собственной люминесценции); поляризационные объективы (без натяжения стекла в оптических элементах, т. е.

не вносящие собственную деполяризацию); фазовые объективы (имеющие фазовый элемент — полупрозрачное кольцо внутри объектива); объективы ДИК (DIC), работающие по методу дифференциально-интерференционного контраста (поляризационные с призменным элементом); эпиобъективы (объективы отраженного света, предназначенные для обеспечения методов светлого и темного поля, имеют в конструкции специально рассчитанные осветительные эпи-зеркала);

• иммерсионные и безыммерсионные объективы.

     Маркировка объективов.

Данные о каждом объективе маркируются на его корпусе с указанием следующих параметров:

• увеличение («х»-крат, раз): 8х, 40х, 90х; • числовая апертура: 0,20; 0,65, • пример: 40/0,65 или 40х/0,65; • дополнительная буквенная маркировка, если объектив используется при различных методах исследования и контрастирования: фазовый — Ф (Рп2 — цифра соответствует маркировке на специальном конденсоре или вкладыше), поляризационный — П (Pol), люминесцентный — Л (L), фазово-люминесцентный — ФЛ (PhL), ЭПИ (Epi, HD) — эпиобъектив для работы в отраженном свете по методу темного поля, дифференциально-интерференционный контраст — ДИК (DIC), пример: 40х/0,65 Ф или Ph2 40x/0,65;

• маркировка типа оптической коррекции: апохромат — АПО (АРО), планахромат — ПЛАН (PL, Plan), планапохромат — ПЛАН-АПО (Plan-Аро), улучшенный ахромат, полуплан — СХ — стигмахромат (Achrostigmat, CP-achromat, Achroplan), микрофлюар (полуплан-полуапохромат) — СФ или М-ФЛЮАР (MICROFLUAR, NEOFLUAR, NPL, FLUOTAR).

Окуляры микроскопа

     Оптические системы, предназначенные для построения микроскопического изображения на сетчатке глаза наблюдателя. В общем виде окуляры состоят из двух групп линз: глазной — ближайшей к глазу наблюдателя — и полевой — ближайшей к плоскости, в которой объектив строит изображение рассматриваемого объекта.

     Окуляры классифицируются по тем же группам признаков, что и объективы: 1. окуляры компенсационного (К — компенсируют хроматическую разность увеличения объективов свыше 0,8%) и безкомпенсационного действия; 2. окуляры обычные и плоского поля; 3.

окуляры широкоугольные (с окулярным числом — произведение увеличения окуляра на его линейное поле — более 180); сверхширокоугольные (с окулярным числом более 225); 4. окуляры с вынесенным зрачком для работы в очках и без; 5. окуляры для наблюдения, проекционные, фотоокуляры, гамалы;

6.

окуляры с внутренней наводкой (с помощью подвижного элемента внутри окуляра происходит настройка на резкое изображение сетки или плоскость изображения микроскопа; а также плавное, панкратическое изменение увеличения окуляра) и без нее.

Маркировка окуляров.
На окулярах маркируют следующие характеристики:

• линейное увеличение окуляра: 10х, 15х • линейное поле зрения (в мм): 18, 20, 22 • пример: 10х/18 • работа в очках (дополнительный символ в виде очков); • фокусировочный (передвижной) элемент внутри окуляра для наводки на резкость изображения сетки окуляра (foc.)

• тип коррекции (Pl) или компенсация хроматической разности увеличения (К)

Источник: http://www.Laborant.net/specialist/publications/mech/96/

Работа с объективом масляной иммерсии

Работа с иммерсионным объективом.: 1. Поставить объектив с увеличением х90 или х100. 2. На мазок нанести

Порядок работы:

· Добиться четкого изображения объекта в поле зрения с помощью сухого объектива малого увеличения и определить наиболее подходящий для исследования участок препарата.

· Поворотом револьвера вывести сухой объектив из хода лучей и сместить объективы так, чтобы стал свободным доступ к препарату.

· Нанести на выбранный участок препарата одну каплю иммерсионного масла. Капля должна свободно упасть на стекло (при этом желательно немного смазать иммерсионным маслом фронтальную линзу объектива).

Пипетка капельницы масла ни в коем случае не должна соприкоснуться с мазком!

В противном случае Этоэто может привести к переносу микобактерий с одного мазка на другой, к загрязнению иммерсионного масла и получению ложноположительного результата микроскопического исследования.

· Поворотом головки револьверного устройства установить объектив с сильным увеличением (90х – 100х) непосредственно над препаратом.

· Под визуальным контролем (глядя сбоку) медленно вращают макровинт грубой фокусировки и поднимают столик микроскопа до появления мениска в момент соприкосновения фронтальной линзы объектива с поверхностью капли масла.

Никогда не касайтесь линзой предметного стекла. Это может повредить линзу или разбить препарат.

· Глядя в окуляр, с помощью винтов грубой и точной регулировки произвести настройку на резкость. Во время выполнения этой манипуляции будьте особенно внимательны и смещайте винты на небольшой ход, не допуская бесконтрольно полного оборота винтов.

В случае появления в поле зрения пузырьков воздуха операцию настройки (момент соприкосновения фронтальной линзы объектива с иммерсией) необходимо повторить, протерев объектив салфеткой со спиртом.

Микроскоп готов к работе.

При микроскопическом исследовании мазка, окрашенного по Ziehl—Neelsen, следует просматривать не менее 100 полей зрения. В том случае, если результат такого исследования оказывается отрицательным, для необходимо просмотреть еще 200 полей зрения.

При микроскопическом исследовании препарата необходимо быть уверенным, что ни одно поле зрения препарата не просматривается повторно, поэтому рекомендуется просматривать препарат всегда по одной и той же схеме:

— либо 3 параллельных прохода по длине препарата,

— либо 9 параллельных проходов по ширине.

Микроскопировать начинают с левого верхнего выбранного в мазке поля зрения, постепенно передвигаясь либо вдоль продольной оси препарата до конца мазка, либо смещаясь вниз и затем вновь поднимаясь вверх и т.д., проходя все поля зрения до границы мазка.

При увеличении микроскопа 1000х, т.е. 100х для масляно-иммерсионного объектива и 10х для окуляра при исследовании одной длины мазка (» 20 мм) за один продольный проход просматривается около 100 – 120 полей зрения (диаметр поля зрения – 0,16 – 0,2 мм).

При люминесцентной микроскопии с использованием объектива 25х и окуляра 10х площадьразмер поля зрения примерно в 10 раз больше, поэтому просматривается меньшее число полей зрения. Однако при отрицательном результате или малом количестве выявляемых микобактерий следует просматривать не менее 100 полей зрения.

При значительном количестве кислотоустойчивых микобактерий достаточно исследовать 20 — 50 полей зрения как при окраске по Ziehl–Neelsen, так и при люминесцентной микроскопии (см. тТаблицу 3).

По окончании микроскопического исследования каждого препарата следует:

· освободить препарат от держателей – клемм препаратоводителя;

· снять препарат с предметного столика микроскопа;

· сверить идентификационный номер и записать результат микроскопии на специальном листе бумаги, на котором перед началом микроскопии написать в столбик порядковые номера препаратов, подлежащих исследованию;

· затем, удерживая препарат за ребра стекла в участке, где нанесен порядковый номер, положить препарат на покрытый фильтровальной бумагой поднос (лоток) в вытяжной шкаф;

· для удаления иммерсионного масла накрыть препарат полоской фильтровальной бумаги;

· смочить ее несколькими каплями ксилола, спирто-эфирной смесью или спиртом;

· через 2 — 3 минуты фильтровальную бумагу удалить;

· очищенный от иммерсионного масла препарат поместить в коробку для просмотренных стекол.

При большом количестве исследуемых препаратов рекомендуется заранее подготовить 2 выстланных фильтровальной бумагой подноса (лотка) — для положительных и отрицательных препаратов — и удаление иммерсионного масла производить по окончании микроскопического исследования одновременно со всех просмотренных препаратов или части их.

В зависимости от результатов микроскопического исследования просмотренный препарат поместить в коробку для положительных или для отрицательных препаратов.

Перед тем, как взять для исследования следующий препарат, необходимо протереть иммерсионную линзу кусочком специальной ткани или марлевым тампоном с рекомендованным растворителем.

По окончании микроскопического исследования всей партии мазков выполнить следующие процедуры:

— с помощью бумажной или марлевой салфетки протереть линзы микроскопа спирто-эфирной смесью или спиртом;

— опустить предметный столик микроскопа, отдалив его от объективов;

— уменьшить интенсивность освещения и выключить источник освещения микроскопа;

— накрыть микроскоп полиэтиленовым или пластиковым пакетом;

— расставить все необходимое для микроскопии оборудование и дополнительные материалы в утановленномустановленном порядке;

— снять и удалить одноразовые перчатки;

— вымыть руки с мылом;

— перенести результаты микроскопического исследования в лабораторный регистрационный журнал и на бланки ответов.

Просмотров 810 Эта страница нарушает авторские права

Источник: https://allrefrs.ru/1-6831.html

Порядок работы с иммерсионной системой

Работа с иммерсионным объективом.: 1. Поставить объектив с увеличением х90 или х100. 2. На мазок нанести

1. Выбирают объектив с увеличением х90 или х100.

2. Поднимают конденсор и открывают диафрагму.

3. Наводят свет под малым увеличением сухой системы (х8).

4. На препарат наносят небольшую каплю иммерсионного (кедрового) масла и, глядя сбоку, под контролем глаза, иммерсионный объектив осторожно опускают, погружая его в масло.

5. Тубус очень медленно поднимают, вращая сначала макро-, а затем микрометрический винт, при помощи которого настраивается ясное изображение объекта (микровинт поворачивают не более чем 0,5 оборота в ту или другую сторону). Препарат просматривают в нескольких полях зрения.

6. После просмотра препарата масло с иммерсионного объектива удаляют чистой марлевой салфеткой и переводят револьвер на объектив малого увеличения (х8).

Темнопольная микроскопияпозволяет наблюдать живые бактерии.

При микроскопии этим методом лучи освещающие объект, не попадают в объектив микроскопа, поле зрения остается темным, а объект на его фоне кажется светящимся. Эффект темного поля создается при помощи специального конденсора (параболоид или кардиоид).

Для наблюдения в темном поле свет устанавливают и центрируют как

для светлого поля, и, заменив конденсор на специальный, прибавляют свет до максимума. Препараты для исследования в темном поле готовят на очень чистых предметных и покровных стеклах определенной толщины: предметные – не более 1,2 мм, покровные – 0,17 мм.

Фазово-контрастная микроскопияпозволяет изучать живые и неокрашенные объекты за счет повышения их контрастности. Распространение световых волн в прозрачных однородных объектах не сопровождается потерей интенсивности света.

При прохождении света чрез неокрашенные объекты изменяется фаза

световой волны, что и используется в фазово-контрастной и интерференционной микроскопии. Меняется скорость прохождения света через объект по сравнению со скоростью света в окружающей среде.

Она будет большой или меньшей в зависимости от того будет ли показатель светопреломления объекта соответственно больше или меньше, чем в окружающей среде.

Эти колебания, называемые фазовыми, так как при них меняется только фаза колебания прошедшего света характерны для большинства биологических объектов.

Глаз человека не способен воспринимать фазовые изменения света. По-

этому неконтрастные (фазовые) объекты при обычном микроскопическом исследовании остаются невидимыми. Zernike предложил специальное устройство конденсора и объектива, которые регулируют изменения фазы световых волн и превращают разность фаз в разность интенсивностей, благодаря чему детали строения объекта становятся доступными для глаз.

Для работы по методу фазового контраста нужно, кроме обычного био-

логического микроскопа, иметь еще специальное устройство. Установку устройства производят следующим образом. Кондерсор и объектив заменяют фазовыми. Основным условием является оптимальная освещенность, которая достигается установкой света по Келлеру.

Фазовый конденсор поворотом револьверного диска устанавливают на 0. Это положение соответствует обычному светлопольному конденсору. Только после этого устаналивают револьверный диск на то число, которое соответствует выбранному объективу. Используют объективы апохроматы.

Окуляр обычного светового микроскопа заменяется на вспомогательный, который настраивают на изображение двух колец (кольцевая диафрагма конденсора и фазовая пластинка). Для повышения контрастности фазовые кольца покрывают металлом, поглощающим прямой свет, не влияя на сдвиг фазы.

Центрировочным устройством конденсора добиваются совмешения колец. Заменив вспомогательный окуляр на обычный можно производить исследование препарата.

Поляризационная микроскопия позволяет получить изображение неокрашенных анизотропных структур; интерференционная микроскопия, объединяющая принципы фазово-контрастной и поляризационной микроскопии применяется для получения контрастного трехмерного изображения неорашенных обектов. Специальная интерференционная оптика (оптика Номаркского) нашла применение в микроскопах с дифференциальным интерференционным контрастом.

Контрольные вопросы:

1. Назначение и принцип устройства бактериологической лаборатории.

2. Правила поведения и работы в лаборатории.

3. Правила взятия и пересылки патологического материала.

4. Методы микробиологического исследования.

5. Принцип работы с иммерсионной системой микроскопа.

Тема № 2

Приготовление прижизненных
препаратов

Основное требование при работе с микроорганизмами – соблюдение асептики, т.е.

таких условий, при которых в пробирку с изучаемой культурой не могли бы попасть другие микроорганизмы (например, из воздуха, с предметов, используемых в процессе выполнения работы).

Кроме того, нужно иметь в виду, что среди микроорганизмов многие условно патогенны, что требует повышенного внимания и аккуратности в работе.

Для работы с микроорганизмами используют специальные бактериологические петли, иглы, шпатели. Бактериологические петли изготовляют из проволоки, которую закрепляют в специальных металлических держателях или впаивают в стеклянные палочки. Толщина игл и петель не должна превышать 0,5 мм (рис. 10).

Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: пробирках, колбах или чашках Петри. В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Пробирки со средами и культурами при работе следует устанавливать на штативах.

Бактериологическая петля прокаливается, пробки и край пробирки фламбируются. Если в работе используют суспензии микроорганизмов или культуры, выращенные на жидких средах, их берут предварительно простерилизованной пипеткой, у которой широкий конец закрыт ватой. Такие пипетки стерилизуют и хранят завернутыми в бумагу (каждая отдельно).

Изучают микроорганизмы, изготавливая препараты из них. Для этого применяют чистые, хорошо обезжиренные стекла, на поверхности которых капля воды свободно растекается.

При микроскопировании можно использовать препараты из культур, выращенных в жидких средах.

Небольшое количество бактериальной массы из культуры, выращенной на плотных средах, можно суспендировать (развести) с помощью стерильной бактериологической петли или иглы в капле стерильной жидкой среды или физиологического раствора. В зависимости от цели исследования готовят прижизненные или фиксированные препараты.

Определение подвижности у микробов

В практике бактериологических лабораторий часто исследуют живых бактерий с целью определения подвижности, т.к. это важный видовой признак, имеющий диагностическое значение. Поэтому все микробы делят на две группы: подвижные и неподвижные.

Например, возбудитель сибирской язвы и антракоиды (сибиреязвенно-подобные бациллы) сходны по ряду морфологических и культуральных признаков, однако сибиреязвенная бацилла неподвижна, а антракоиды – активно подвижны.

Движение микробов происходит при помощи: а) жгутиков, которые представляют собой тончайшие извитые нити, отходящие от тела бактерий; б) змеевидных движений тела; в) реактивного движения по поверхносям при одновременном резком выделении слизи; г)аэросом – специальных органоидов, заполненных газом, из глубины водоёма к поверхности.

Для прижизненных наблюдений наиболее часто готовят препараты

«раздавленная капля» или «висячая капля».

Метод «раздавленной капли»:

1. На предметное стекло носят каплю физиологического раствора.

2. Бактериологической петлей вносят культуру микроорганизма с плотной питательной среды (при исследовании микробной культуры, полученной с жидкой питательной среды, физиологический раствор наносить не надо).

3. Каплю накрывают покровным стеклом.

Метод «висячей капли»:

1. На края предметного стекла с лункой наносят тонкий слой вазелина.

2. В центр покровного стекла помещают каплю микробной культуры. Капля должна быть круглая, выпуклая, с ровными краями.

3. Переворачивают предметное стекло и накрывают им каплю на покровном стекле так, чтобы она оказалась напротив центра лунки (Рис.3).

В таких условиях капля дольше не высыхает и легче соблюдать технику безопасности.

В обоих случаях микроскопию проводят в затемненном поле: конденсор опускают, диафрагму суживают. Объектив х40 или х90 (под иммерсией).

На светло-сером фоне микробы темно-серые.

Рис. 3. Метод «висячей капли».

Прижизненная окраска микробов

Для изучения морфологических особенностей микробов проводят их прижизненную окраску, с целью определения подвижности, характера деления, реакции на химические вещества и т.п.

Живые микробы мало восприимчивы к красителям, окрашиваются только погибшие клетки.

При микроскопических исследованиях для прижизненной окраски микробов используют:

Метод Фиккерта:

На предметное стекло наносят каплю бульонной культуры, в которую вносят каплю нейтральрота перемешивают и накрывают покровным стеклом так, чтобы жидкость доходила до края покровного стекла.

Микроскопируют немедленно под увеличением объектива х40. Кроме выявления формы микроба определяют его подвижность.

Метод Наканиши:

1. На предметное стекло наносят каплю горячего 0,001% раствора метиленового синего и высушивают в термостате.

2. Салфеткой тщательно растирают каплю по поверхности стекла до бледно-голубого цвета.

3. На окрашенном стекле готовят препарат «раздавленная капля»
(см. определение подвижности у микробов).

4. Краска растворяется, и микробы окрашиваются сначала в голубой, а потом в синий цвет.

Для более детального изучения морфологии микроорганизмов, их тинкториальных свойств готовят фиксированные, окрашенные преараты на предметных стёклах.

Источник: https://cyberpedia.su/9x7ce5.html

Scicenter1
Добавить комментарий